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  1.本发明涉及饲料技术领域，具体而言涉及一种适用于饲料的复合抗氧化剂、制备方法及应用。

  2.饲用抗氧化剂是一类能够有效阻止或延缓饲料自动氧化，提高饲料氧化稳定性的物质。目前，用于饲料中的抗氧化剂，主要是人工合成类抗氧化剂，例如二丁基羟基甲苯(bht)，bht稳定性强，可保护饲料中的油脂、维生素和胡萝卜素等，可提高畜禽肉质的嫩度，维持蛋黄与胴体的色素沉着，已大范围的应用于猪、鸡、反刍动物及鱼类饲料中，作为供氢供电子体，稳定高效地清除多种自由基，终止自由基链式反应，提升产品抗氧化稳定性。

  3.抗氧化剂不仅在饲料中起抗氧化作用，被动物食用后也能通过改善体内的抗氧化系统发挥作用，例如，bht在体内能大大的提升机体抗氧化能力、免疫能力，还能调节机体的脂肪酸代谢和固醇代谢，减少o2·-和oh

  的产生。日粮添加125mg/kg bht能显著缓解饲喂氧化豆油引起的腿肌sod含量降低，提高胸肌中cat活性和肝脏中cat和sod活性。bht还可调节脂代谢与能量代谢相关基因的表达、线粒体三羧酸循环酶和呼吸链复配体酶的活性，bht在小肠阶段被吸收后，大量沉积在组织中，提高了肌肉组织在冷藏与冷冻储存过程中的氧化稳定性。

  4.但是，在慢慢的变多的动物试验中发现bht如果过量或经常使用，会对畜禽机体造成毒副作用，例如肝损伤、肝肿瘤、肝癌、抑制体重增长，对血清脂质和心肌能量代谢产生负面影响。

  5.天然植物源性抗氧化剂是存在于自然界中的生物活性化合物，在不改变其化学结构的前提下，通过水或有机溶剂萃取而得。酚类化合物是天然抗氧化剂应用最为广泛的一类，到目前为止已经鉴定了8000种以上的多酚，如类黄酮、酚酸、单宁、花青素、木脂素等。近年来的研究证明多酚具有非常明显的抗氧化、抗炎、抗菌、抗癌、抗糖尿病以及心脏和神经保护等生物活性，还可当作益生元，增加肠道微生物的多样性，有益的改变微生物的组成，促进健康。酚类物质根据连接羟基与苯环等结构元素的数量，分为类黄酮和非类黄酮两大类。其中类黄酮占植物中总酚含量的一半以上。至今报道的类黄酮已超过9000种，其中黄酮醇是植物界中最普遍且能被体内吸收，并在血浆中积累的类黄酮亚类，主要成分有槲皮素、木犀草素和芹菜素等。

  6.但是天然植物源性抗氧化剂存在提取工艺复杂，成本比较高，抗氧化效果不稳定等问题，并且在添加至饲料中后，由于受到各种各样的环境和饲料因素破坏，包括饲料的制粒工艺、贮存时间长、仓储条件等，会导致它们还没进入机体就已被氧化或中和，失去了原有的抗氧化活性，从而没办法发挥作用。

  7.因此，如何采用措施降低合成类抗氧化剂用量，保护天然抗氧化剂以其生物活性形式进入机体发挥作用，达到体外体内抗氧的双重功效是一个急需解决的问题。

  8.本发明目的是针对现有天然植物源性抗氧化剂在进入机体之前就失去原有的抗氧化活性以及合成类抗氧剂用量受限的问题，提供一种适用于饲料的复合抗氧化剂，通过采用bht与天然抗氧剂复配，降低bht用量的同时，提高天然抗氧化剂的稳定性，确保其在进入机体前不被氧化破坏、仍能以其生物活性形式进入机体内发挥作用。

  9.根据本发明目的的第一方面，提供一种适用于饲料的复合抗氧化剂，按重量份数计，每200重量份的复合抗氧化剂包括：50～75重量份的bht，0～50重量份的槲皮素，0～50重量份的芹菜素，0～50重量份的木犀草素，余量为载体。

  10.在可选的实施方式中，bht、槲皮素、芹菜素和木犀草素的质量比为(0.5～0.7)：(0.1～0.2)：(0.1～0.3)：(0.1～0.2)。

  12.可选的实施方式中，bht、槲皮素、芹菜素和木犀草素的纯度均大于90％。

  13.根据本发明目的的第二方面，提供一种前述适用于饲料的复合抗氧化剂在制备肉仔鸡饲料中的应用。

  14.根据本发明目的的第三方面，提供一种饲料，所述饲料中含有前述适用于饲料的复合抗氧化剂。

  15.可选的实施方式中，复合抗氧化剂在饲料中的添加量为200～2000mg/kg。

  16.根据本发明目的的第四方面，提供一种前述适用于饲料的复合抗氧化剂的制备方法，包括以下步骤：

  18.将槲皮素、芹菜素、木犀草素混合后，于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  19.往一级混合物内加入bht和稀释性载体，混合均匀，过筛，得到复合抗氧化剂。

  21.1、本发明的适用于饲料的复合抗氧化剂，以玉米芯作为载体，采用bht与槲皮素，芹菜素，木犀草素组成的天然抗氧剂进行复配，利用bht优秀的自由基中和活性，提高天然抗氧化剂的稳定性，确保其在进入机体前不被氧化破坏、仍能以其生物活性形式进入机体内发挥作用；同时，bht本身是一种体内外的抗氧化添加剂，人工抗氧剂与天然抗氧剂互补协同，共同发挥延缓或终止的自由基链式反应，提升抗氧化能力，保护动物免受氧化应激带来的损伤。

  22.2、本发明的适用于饲料的复合抗氧化剂，在体外能够对饲料抗氧保鲜，延长储存期限；在体内可以在一定程度上促进动物生长、调节器官指数、血清抗氧化活性和肉的品质。

  23.3、本发明的适用于饲料的复合抗氧化剂，克服了单纯人工合成抗氧化剂副作用问题和天然抗氧化剂高价格、不稳定性问题，并且降低了合成剂的使用量，提高饲用抗氧剂安全性，促进饲料行业可持续发展。

  25.本公开的实施例不必定意在包括本发明的所有方面。应当理解，上面介绍的多种

  构思和实施例，以及下面更详细地描述的那些构思和实施方式能以很多方式中任意一种来实施。

  26.在本发明优选的实施例中，提供一种适用于饲料的复合抗氧化剂，按重量份数计，每200重量份的复合抗氧化剂包括：50～75重量份的bht，0～50重量份的槲皮素，0～50重量份的芹菜素，0～50重量份的木犀草素，余量为载体。

  27.在可选的实施方式中，bht、槲皮素、芹菜素和木犀草素的质量比为(0.5～0.7)：(0.1～0.2)：(0.1～0.3)：(0.1～0.2)，bht、槲皮素、芹菜素和木犀草素的质量比尤其优选为0.5：0.1142：0.2269：0.1589。

  29.可选的实施方式中，bht、槲皮素、芹菜素和木犀草素的纯度均大于90％。

  30.在本发明另一个优选的实施例中，提供一种前述适用于饲料的复合抗氧化剂在制备肉仔鸡饲料中的应用。

  31.在本发明另一个优选的实施例中，提供一种饲料，所述饲料中含有前述适用于饲料的复合抗氧化剂。

  32.可选的实施方式中，复合抗氧化剂在饲料中的添加量为200～2000mg/kg。

  33.在另一个可选的实施方式中，复合抗氧化剂在饲料中的添加量为200～1500mg/kg，尤其优选为200mg/kg。

  34.在本发明另一个优选的实施例中，提供一种前述适用于饲料的复合抗氧化剂的制备方法，包括以下步骤：

  36.将槲皮素、芹菜素、木犀草素混合后，于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  37.往一级混合物内加入bht和稀释性载体，混合均匀，过筛，得到复合抗氧化剂。

  38.下面将结合具体的示例和试验，对前述抗氧剂的制备及其效果进行示例性试验和对比。当然本发明的实施例并不以此为限。

  39.下述实施例中所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施方式中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

  40.纯大豆油购自江苏盐城汞沟农家作坊；bht购自江苏迈达新材料股份有限公司，槲皮素、芹菜素和木犀草素均购自上海麦克林生化科技有限公司；1日龄爱拔益加(aa)肉仔鸡购自南京海发牧业有限公司。

  43.将1kg bht和1kg玉米芯混合均匀，过80目筛，得到抗氧化剂。

  45.将0.25kg槲皮素于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  46.往一级混合物内加入0.75kg bht和1kg玉米芯，混合均匀，过80目筛，得到抗氧化剂。

  48.将0.25kg芹菜素于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  49.往一级混合物内加入0.75kg bht和1kg玉米芯，混合均匀，过80目筛，得到抗氧化剂。

  51.将0.25kg木犀草素于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  52.往一级混合物内加入0.75kg bht和1kg玉米芯，混合均匀，过80目筛，得到抗氧化剂。

  54.将0.167kg槲皮素和0.166kg芹菜素于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  55.往一级混合物内加入0.667kg bht和1kg玉米芯，混合均匀，过80目筛，得到抗氧化剂。

  57.将0.167kg芹菜素和0.166kg木犀草素于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  58.往一级混合物内加入0.667kg bht和1kg玉米芯，混合均匀，过80目筛，得到抗氧化剂。

  60.将0.125kg槲皮素、0.125kg芹菜素和0.125kg木犀草素于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  61.往一级混合物内加入0.625kg bht和1kg玉米芯，混合均匀，过80目筛，得到抗氧化剂。

  63.将0.25kg芹菜素、0.25kg木犀草素于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  64.往一级混合物内加入0.5kg bht和1kg玉米芯，混合均匀，过80目筛，得到抗氧化剂。

  66.将0.167kg槲皮素、0.167kg芹菜素和0.166kg木犀草素于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  67.往一级混合物内加入0.5kg bht和1kg玉米芯，混合均匀，过80目筛，得到抗氧化剂。

  69.将0.25kg槲皮素、0.25kg芹菜素于氮气保护条件下进行均质处理，得一级混合物；

  70.往一级混合物内加入0.5kg bht和1kg玉米芯，混合均匀，过80目筛，得到抗氧化剂。

  73.(一)使用jmp混料设计软件，根据预先设置的有关响应因子与约束条件，得到20组合比例(如表1所示)，并按照实施例的方法得到1-20号样品，重复得到足够多的样品。

  称取500ml新鲜纯大豆油中，置于1l烧杯中，以200mg/kg的剂量分别添加1-20号复合抗氧化剂。充分混匀后，将大豆油在hj-6a多头磁力加热搅拌器上加热到120℃后，使用氧气泵不间断的通空气(3.0l/min)，氧化10个小时，测定氧化油脂的过氧化值、酸价、茴香胺值、丙二醛、dpph基清除率、frap和abts清除力，结果如表2所示。

  表2不同处理油脂的过氧化值、过氧化值、酸价、丙二醛、茴香胺值、dpph清除率、frap和abts清除力

  (二)使用jmp混料设计软件，在表2结果的基础上根据预先设置的有关响应因子与约束条件，将得到的油脂抗氧化指标结果，通过jmp混料设计软件制作的回归方程和图形，获得统计结论。

  根据统计结论，获得本发明的复合抗氧化剂按重量份数计，每200重量份的复合抗氧化剂包括：50～75重量份的bht，0～50重量份的槲皮素，0～50重量份的芹菜素，0～50重量份的木犀草素，余量为载体；其中，bht、槲皮素、芹菜素和木犀草素的质量比更优为(0.5～0.7)：(0.1～0.2)：(0.1～0.3)：(0.1～0.2)，bht、槲皮素、芹菜素和木犀草素的最佳质量比为0.5：0.1142：0.2269：0.1589。

  (三)以最佳比例组合为例(即bht、槲皮素、芹菜素和木犀草素的最佳质量比为0.5：0.1142：0.2269：0.1589)，按照实施例的方法制备复合抗氧化剂，记为21号样品，制备新鲜油脂、氧化油脂、分别添加了bht和21号样品的油脂，测定它们的过氧化值、酸价、茴香胺值、丙二醛、dpph清除率、frap和abts清除力，结果如表3所示。

  表3拟合处理组油脂的过氧化值、酸价、茴香胺值、丙二醛、dpph清除率、frap和abts清除力

  由表3可知，21号样品明显降低大豆油的过氧化值、酸价、茴香胺值、丙二醛等油脂氧化初级和次级代谢产物，提高大豆油的abts清除力；说明在大豆油中添加本发明的复合抗氧化剂可阻止大豆油在加热条件下发生的氧化酸败过程，延长饲用油脂的货架期。

  (一)选择1日龄健康的aa肉鸡384只(雌雄各半)，随机分为4个处理组，每个处理组8个重复，每个重复12只肉鸡。

  对照组饲喂含有新鲜大豆油的基础日粮，氧化油脂组饲喂含有氧化酸败大豆油的基础日粮，复合抗氧化剂组饲喂含有氧化酸败大豆油的基础日粮+200mg/kg为21号样品，bht组饲喂含有氧化酸败大豆油的基础日粮+200mg/kg bht。

  基础饲粮按照nrc(1994)的营养需求标准配制的玉米-豆粕型饲粮，基础饲粮的组成和营养水平如表4。试验期42d，分前期(1-21d)和后期(21-42d)两个阶段。计算采食量、日增重和料重比，结果如表5所示。

  在第21d和42d，从每组每个重复中随机选取1只肉鸡，共8只，称重后，颈静脉处放血处死，切开颈部和腹腔，取出心脏、脾脏、肝脏、胸腺和法氏囊清理并称重，计算器官指数，结果如表6所示。

  (二)分离血清，测定抗氧化相关指标，结果如表7所示；分离胸肌，测定肌肉品质和抗氧化相关酶活，结果如表8、表9所示。

  由表5能够准确的看出，在21-42d和1-42d阶段氧化油脂组的日增重明显高于对照组，复合抗氧化剂组(21号样品组)的日增重与对照组相比没有显著差异，说明将本发明的复合抗氧化剂用于肉鸡饲料中，可降低饲喂氧化油脂导致的日增重异常升高，日增重、日均采食量、料重比和末体重与对照组接近，不会对肉鸡生产产生不利影响，反而使饲喂氧化油脂后肉鸡异常升高日增重恢复至正常水平。

  由表6可知，氧化油脂组21d的心脏指数明显高于对照组，而复合抗氧化剂组(21号样品)的心脏指数明显低于氧化油脂组，与对照组无显著差异，说明将本发明的复合抗氧化剂用于肉鸡饲料中，可缓解饲喂氧化油脂的心脏肿大。

  由表7可知，复合抗氧化剂组(21号样品组)血清的谷胱甘肽和维生素e含量明显低于氧化油脂组和对照组，说明饲喂复合抗氧化剂后，机体可调动更多的抗氧化物质，包括谷胱甘肽和维生素e，用以中和氧化油脂导致的各种活性氧自由基的增多。与氧化油脂组相比，复合抗氧化剂组的蛋白羰基浓度明显降低，表明本发明的复合抗氧化剂能保护蛋白质大分子物质免受氧化油脂造成的氧化修饰，维持蛋白质的功能性稳定。

  由表8可知，与氧化油脂组相比，复合抗氧化剂组(21号样品组)胸肌的ph 24

  明显降低，但与对照组相比差异不显著；复合抗氧化剂对胸肌肉色没有显著影响。

  由表9可知，饲喂复合抗氧化剂(21号样品)显著降低了胸肌总超氧化物歧化酶的活性和谷胱甘肽的浓度。这一结果与血清抗氧化相关指标的变化趋势基本一致，说明本发明的复合抗氧化剂在激活机体抗氧化系统方面有积极的影响。

  从上述结果能看出，饲喂全期，相比与饲喂新鲜油脂，氧化油脂以及在氧化油脂中添加bht使肉仔鸡生长性能明显提高，但对肉鸡造成一定的氧化损伤，对肉鸡的器官造成一定的损害，血清和肌肉抗氧化性能直线下降以及肉品质降低。

  本发明的抗氧剂可明显降低心脏绝对重量和器官指数，对肉仔鸡的氧化损伤均具有一定改善作用并有降低血清蛋白损伤的作用，对肉仔鸡胸肌品质和抗氧化性能有所提高。

  由上可知，本发明的抗氧剂，稳定有效，在体外能够对饲料抗氧保鲜，延长储存期限；组分中的天然抗氧化剂以其生物活性形式进入机体内发挥作用，并且人工抗氧剂与天然抗氧剂互补协同，共同发挥延缓或终止的自由基链式反应，提升抗氧化能力，保护动物免受氧化应激带来的损伤，促进动物生长、调节器官指数、血清抗氧化活性和肉的品质。

  虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明。本发明所属技术领域中具有通常知识者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作各种的更动与润饰。因此，本发明的保护范围当视权利要求书所界定者为准。