本发明涉及饲料添加剂效果的评估，具体指饲料抗氧化剂的效果评估方法，本方法能够预测饲料抗氧化剂添加后饲料的保质期，属于饲料添加剂效果评价技术领域。

  饲料在存放过程中容易氧化哈败。为了更好的提高饲料的新鲜度，在饲料中添加饲料抗氧化剂已是普遍现象。但如何来评估饲料抗氧化剂的效果，并为生产实践提供科学指导，目前尚无统一的国家标准。

  目前，饲料添加剂企业和饲料企业在评估抗氧化剂效果时普遍采用的方法有：①过氧化值法：过氧化物是油脂氧化的中间产物，它会被进一步氧化成醛、酮、酸等终产物。所以，过氧化值一般是先升后降，呈抛物线状，单靠过氧化值的高低并不能说明问题。正常的情况下，饲料添加剂企业或饲料企业都认为过氧化值较低为好，但如果该值是峰值后的测定值，较低实际上表示氧化程度比测定值更严重。此外，饲料添加剂企业或饲料企业一般是在一定条件下(一般40℃左右)存放饲料，每隔一个固定的时间(一般是一周、10天或半个月)测定一次过氧化值。该方法的问题是，在饲料存放早期，往往空白对照的饲料都未氧化哈败，添加有抗氧化剂的试验组就更不会氧化哈败了，所以此时的过氧化值测定是白测了，大幅度提升了试验的劳动强度，而且浪费试验资源。还有，按固定时间间隔去测定过氧化值，很难保证测定值都是在峰值前测定的。②酸价法：这是测定氧化终产物酸的方式，一般来说酸价越高，氧化程度越严重。③TBA值法：该方法测定的主要是终产物丙二醛，一般来说TBA值越高，氧化程度越严重。酸价法和TBA值法这两种终产物的方法都属于严重氧化下的产物，此时饲料的哈味早已出来，对于饲料企业来说，客户早已要求退货了，研究测定这样的数据对饲料生产实践无任何指导作用，只能用于纯理论研究。④自然存放法：就是将饲料在常温条件下存放，每隔一个固定的时间间隔(饲料添加剂企业或饲料企业一般选择一周、10天或半个月)后，闻饲料的气味，以无哈味或哈味较轻者为好。该方法与饲料生产真实的情况极为相似，因此可靠度高，但是试验周期太长，效率低下。此外，哈味随温度的升高而挥发性加快。试验证明，在高温下(如100℃)刚好能闻到的饲料哈味，将它自然冷却至常温后，就闻不到哈味了。因此，常温下能闻到哈味时，说明饲料已经氧化哈败有一定的时间，说明该方法的准确性也是有局限性的。⑤综合法：有添加剂企业或饲料企业采用上述几种方法中的二种或二种以上的办法来进行综合评价，尽可能地提高准确度，但效果依然不理想。比如氧化程度主要靠语文的程度副词来区分(如未哈，哈味较轻，有哈味，哈味较重，哈味严重)，没有可以量化的科学依据，不同人对哈味程度的感受能力是不一样的，所以这为饲料企业准确评估不同抗氧化剂的效果差异增加了不小的难度。

  针对现存技术对饲料抗氧化剂效果评估方法存在的上述不足，本发明的目的是提供一种添加抗氧化剂后饲料抗氧化效果评估方法及饲料保质期预测方法，本方法采用高温加速氧化试验来评估饲料抗氧化剂效果，具有哈败程度可量化、可比性强、重复性好、可预测饲料添加抗氧化剂后在常温下的保质期。

  1)准备基础饲料和饲料抗氧化剂，所述基础饲料为不包含饲料抗氧化剂的饲料产品；

  2)试验样品的配置：将饲料抗氧化剂按行业规范添加量添加到基础饲料中并混合均匀以构成试验样品，以不添加任何饲料抗氧化剂的基础饲料作为空白对照样；

  4)当步骤3)的恒温箱达到预设温度并恒定后，将步骤2)所配置的试验样品和空白对照样同时放入该恒温箱内，关好恒温箱的门；

  6)试验观察：从空白对照试验样品开始有哈味时起，每隔固定时间闻一次，至试验样品第一次闻到哈味时止；

  1)准备基础饲料和饲料抗氧化剂，所述基础饲料为不包含饲料抗氧化剂的饲料产品；

  2)试验样品的配置：将饲料抗氧化剂按行业规范添加量添加到基础饲料中并混合均匀以构成试验样品，以不添加任何饲料抗氧化剂的基础饲料作为空白对照样；

  4)当步骤3)的恒温箱达到预设温度并恒定后，将步骤2)所配置的试验样品和空白对照样同时放入同一恒温箱内，关好恒温箱的门；

  6)试验观察：从空白对照试验样品开始有哈味时起，每隔固定时间闻一次，至试验样品第一次闻到哈味时止；

  7)过氧化值的测定：在试验样品第一次闻到哈味时，测定试验样品的过氧化值，记录测定结果；

  9)试验结果判定：以第一次闻到哈味所需要的时间、过氧化值、预测保质期作为抗氧化效果的评价参数，第一次闻到哈味所需要的时间越长、过氧化值越低、预测保质期越长，则抗氧化效果越好。

  1)准备基础饲料和饲料抗氧化剂，所述基础饲料为不包含饲料抗氧化剂的饲料产品；

  2)试验样品的配置：将不同的饲料抗氧化剂按预定的添加量分别添加到相同的基础饲料中并混合均匀以构成与各饲料抗氧化剂对应的试验样品，每个试验样品中基础饲料量相同，不同的饲料抗氧化剂在行业规范添加量的基础上，按照相同的添加成本换算成各自具体的添加量后进行添加；以不添加任何饲料抗氧化剂的基础饲料作为空白对照样；

  4)当步骤3)的恒温箱达到预设温度并恒定后，将步骤2)所配置的所有试验样品和空白对照样同时放入该恒温箱内，关好恒温箱的门；

  6)试验观察：从空白对照试验样品开始有哈味时起，每隔固定时间对所有试验样品和空白对照样闻一次，至最后一个样品第一次闻到哈味时止；

  7)过氧化值的测定：在最后一个样品第一次闻到哈味时，测定所有样品的过氧化值，记录测定结果；

  D-步骤7)测得的需要计算预测保质期的该试验样品的过氧化值，单位mmol/kg；

  E-步骤7)测得的与需要计算预测保质期的该试验样品在测定过氧化值时连续闻到哈味次数相同的包括其本身在内的所有试验样品中过氧化值最低那个的过氧化值，单位mmol/kg；

  如果没有与之在测定过氧化值时连续闻到哈味次数相同的其他试验样品，则E值直接取D值，单位mmol/kg；

  9)试验结果判定：以最后一次未闻到哈味所需要的时间、过氧化值、预测保质期作为抗氧化效果的评价参数，最后一次未闻到哈味所需要的时间越长、过氧化值越低、预测保质期越长，则抗氧化效果越好。

  所述试验温度为100℃时，步骤6)的固定间隔时间为2小时。如果试验温度为常温，则步骤6)的固定间隔时间为10天。

  1、哈味的表示更具科学性和可比性。哈味的严重程度以连续闻到哈味的次数(实际以“+”数量多少，第一次闻到哈味以一个“+”表示，第二次闻到哈味以两个“+”表示，以此类推)来表示，传统方法用单纯文字描述(如稍有哈味，有哈味，哈味较重，哈味重，哈味严重)，划分依据含糊不清，仅凭语文程度副词去感觉性判断，新方法以数据量化每一个“+”的含义，更具可比性和科学性。

  2、试验观察的起点更具目的性和针对性。传统方法观察周期是机械化的每周(或10天，或半个月)一次，不管样品是否哈了，都会按固定时间去观察和测定过氧化值。本方法以空白对照开始能闻到哈味为第一次的观察起点(100℃一般需6-10h，常温下需25-35天)，空白对照组都未哈就不用观察，后面再每隔固定时间(100℃下2h，常温下10天)观察一次。

  3、新方法便于比较效果，最大限度减少过氧化值出现在峰值之后的可能性。高温下第一次能闻到的哈味，冷却到常温下是闻不到哈味的。利用温度上升，分子运动加速的原理，本发明采用高温加快氧化的方法，提高了试验的灵敏度，拉开了样品结果的梯度，便于比较效果，还最大限度减少过氧化值出现在峰值之后的可能性。

  4、降低了试验劳动强度，减少了试验资源的消耗，更加环保。传统方法从试验一开始就按固定的时间间隔去观察和测定过氧化值，空白对照组都没哈仍坚持要测过氧化值，增加了无谓的试验工作量和劳动强度，增加了试验资源的消耗。新方法以空白对照开始能闻到哈味为第一次的观察起点，到试验终点才测定一次过氧化值，减少了试验劳动强度，减少了试验资源的消耗。过氧化值测定所需的主要材料三氯甲烷(又称氯仿)，对环境污染大，测定次数少些会更环保。

  5、新办法能够预测样品在常温下的保存期。大多数化学反应，其反应速率随温度上升而增加。通常认为温度对浓度的影响可忽略，因此反应速率随温度的变化体现在速率常数随温度的变化上。实验表明，对于均相热化学反应，反应温度每升高10K，其反应速率变为原来的2～4倍，即k(T+10K)/k(T)≈2～4，该式由于是荷兰化学家雅可比·范特霍夫(JacobusHendricusVan’tHoff)所发现，因此被称为范特霍夫规则。经反复试验验证，在本方法条件下的倍数为2～2.22左右，为便于计算和提高保险系数，取值为2，基于此，本发明给出了保质期的预测计算公式，可预测保质期，更便于指导实际。

  6、新方法为生产实践提供明显的指导作用。传统方法通过闻哈味，测过氧化值，只能定性地得出不同样品之间的哈败程度，只能大致得出哪个样品效果更好，对实际生产指导作用不大；新方法把样品常温下的预测保质期与每一次的闻哈味、过氧化值的测定科学、紧密地结合起来，不但可以定性，还可以定量计算，对实际生产有明显的指导作用。

  本发明总体思想：将饲料抗氧化剂和基础饲料混合形成试验样品，不加抗氧化剂的基础饲料作为空白对照样；将试验样品和空白对照样同时放入恒温箱，在设定温度下进行氧化试验，通常在高温下加速氧化以提高试验灵敏度，缩短试验周期，最大限度减少过氧化值出现在峰值之后的可能性。在空白对照样品出现哈味时，开始观察记录，直到最后一个样品第一次闻到哈味时止，测定试验样品和空白对照样品的过氧化值，再依据相关值通过计算可预测常温下的保质期。结果判定：以过氧化值较低、最后一次未闻到哈味所需要的时间比较久、高温下预测的常温保质期较长、常温下实际统计的保质期较长者，为抗氧化剂效果更好。

  本发明具体操作时，以高温加速氧化试验为核心，同时辅以常温存放试验为验证。为方便起见，下面分别说明。

  1)混合油脂的制备：动物油和植物油均为饲料级，按质量比(动物油：植物油＝1:1)混合均匀，动物油需加热融化后才能与植物油进行混合，现用现配。

  2)饲料抗氧化剂样品的准备：如果饲料抗氧化剂样品为现成的，只需要备好即可；如果饲料抗氧化剂需要自行配制，按既定的工艺与方法把饲料抗氧化剂配制好(适用于饲料抗氧化剂生产企业抗氧化剂的研发与效果评估)，现用现配。所有样品编好号后备用。

  3)基础饲料的配制：配制玉米-豆粕型自配粉料(其中玉米、豆粕均为饲料级，粉碎成粉末，按质量比玉米：豆粕＝2:1混合均匀)，通过逐级预混的方式添加4％的复合预混料(若想为某成品饲料做生产实践指导，就添加该品种饲料对应的预混料，其他情况可任选一种动物某一生长阶段的成品预混料即可，从合格的预混料生产企业购买成品即可。复合预混料质量精确至1g)，通过逐级预混的方式添加3％的步骤1)所制备的混合油脂(混合油脂质量精确至1g)，最后所得的均匀混合物即为试验的基础饲料，现用现配。称取该基础饲料300克/份样品(精确至1g)于若干塑料空白袋内备用。

  4)试验样品的制备：试验组样品通过逐级预混的方式按行业规范的添加量添加步骤2)所准备的抗氧化剂样品(抗氧化剂样品质量精确至0.0001g)，以不添加任何抗氧化剂的基础饲料作为空白对照。所有制备好的试验样品分别置于若干500ml烧杯中(所有烧杯杯口切忌任何覆盖物遮挡，以保证试验过程中有充足的氧气可以氧化饲料)，并对应编好样品编号。

  5)恒温箱开启：将恒温箱温度设定为高温氧化试验所确定的温度，如100℃，开启恒温箱。

  6)试验样品放入：当步骤5)的恒温箱达到预设温度并恒定后，将步骤4)所制备的试验样品(包括空白对照样)全部放入恒温箱，关好恒温箱的门。

  7)试验计时开始：当放入试验样品后，恒温箱再次恒定到预设温度时，试验计时开始。

  8)试验观察：从空白对照试验样品开始有哈味时起(100℃下一般为6～10小时)，每隔固定时间(100℃为2小时)闻一次，至最后一个样品第一次闻到哈味时止。每次观察，在预先制定好的表格中(范本见表1)做好观察记录。表格中“+”的数量表示连续第几次闻到有哈味，表格中“/”表示未闻到哈味。

  9)过氧化值的测定：在最后一个试验样品闻到哈味时，开始对试验样品(包括空白对照样)进行过氧化值测定。采用GB/T 5009.37中过氧化值“第一滴定法”或者GB/T 5538的办法来进行测定，一般用国际通用单位mmol/kg来表示，测定结果填入预先制定的表格中(范本见表1)。

  10)预测保质期：高温加速氧化试验可以预测常温下的保质期，根据范特霍夫规则，结合本方案反复试验验证，试验温度每降低10℃，对应的保质期约变为原来的2倍。

  D-步骤7)测得的需要计算预测保质期的该试验样品的过氧化值，单位mmol/kg；

  E-出现其他试验样品哈味与需要计算预测保质期的该试验样品哈味相同时，取该哈味相同的所有样品的过氧化值的最低值；如果没再次出现其他样品与该样品哈味相同，此时E值直接取D值，单位mmol/kg。样品哈味相同指在测定过氧化值时，各试验样品连续闻到哈味次数相同，即最慢慢的出现哈味的时间相同。

  11)试验结果判定：以未出现哈味的时间比较久、过氧化值较低、预测保质期较长者为抗氧化效果更好。

  在上述多个抗氧化剂高温加速氧化试验作对比评价的基础上，可以单独进行某抗氧化剂常温保质期的预测，或者某单一抗氧化剂效果的综合评价。同样需要空白对照样，以确定试验样品闻哈味的开始时间点，只是在试验样品第一次出现哈味时就需要测定样品的过氧化值。因为是关于抗氧化剂效果的评价，且预测保质期公式也跟空白对照样过氧化值没关系，所以空白对照样过氧化值可以不测。若需要对比试验样品和空白对照样的过氧化值和保质期，也能够得到空白对照样的过氧化值较和预测保质期。

  1)混合油脂的制备：动物油和植物油均为饲料级，按质量比(动物油：植物油＝1:1)混合均匀，动物油需加热融化后才能与植物油进行混合，现用现配。

  2)饲料抗氧化剂样品的准备：如果饲料抗氧化剂样品为现成的，只需要备好即可；如果饲料抗氧化剂需要自行配制，按既定的工艺与方法把饲料抗氧化剂配制好(适用于饲料抗氧化剂生产企业抗氧化剂的研发与效果评估)，现用现配。所有样品编好号后备用。

  3)基础饲料的配制：配制玉米-豆粕型自配粉料(其中玉米、豆粕均为饲料级，粉碎成粉末，按质量比玉米：豆粕＝2:1混合均匀)，通过逐级预混的方式添加4％的复合预混料(若想为某成品饲料做生产实践指导，就添加该品种饲料对应的预混料，其他情况可任选一种动物某一生长阶段的成品预混料即可，从合格的预混料生产企业购买成品即可。复合预混料质量精确至1g)，通过逐级预混的方式添加步骤1)所制备的混合油脂3％(混合油脂质量精确至1g)，最后所得的均匀混合物即为试验的基础饲料，现用现配。称取该基础饲料300克/份样品(精确至1g)于若干塑料空白袋内备用。

  4)试验样品的制备：试验组样品通过逐级预混的方式按行业规范的添加量添加步骤2)所准备的抗氧化剂样品(抗氧化剂样品质量精确至0.0001g)，以不添加任何抗氧化剂的基础饲料作为空白对照。所有制备好的试验样品分别置于若干500ml烧杯中(所有烧杯杯口切忌任何覆盖物遮挡，以保证试验过程中有充足的氧气可以氧化饲料)，并对应编好样品编号。

  5)恒温箱开启：预先设定好试验温度为30℃，开启恒温箱。本发明设定的30℃比通常意义的常温25℃略高，有两个目的：一是取整数便于比较计算，二是略高于实际常温，这样验证试验结果比饲料厂实际生产存放会略差些，这样的验证试验结果饲料厂能接受的话，生产实际就更没问题，留了一点点保险系数。

  6)试验样品放入：当步骤5)的恒温箱达到预设温度并恒定后，将步骤4)所制备的试验样品全部放入恒温箱，关好恒温箱的门。

  7)试验计时开始：当放入试验样品后，恒温箱再次恒定到预设温度时，试验计时开始。

  8)试验观察：从空白对照试验样品开始有哈味时起(一般为25～35天)，每隔10天闻一次，至最后一个样品第一次闻到哈味时止。在试验结束阶段，为了统计详细准确的保质期天数，能结合实际经验数据，并每天闻一次，做好记录。每次观察，在预先制定好的表格中(范本见表2)做好观察记录。表格中“+”的数量表示连续第几次闻到有哈味，表格中“/”表示未闻到哈味。

  9)过氧化值的测定：采用GB/T 5009.37中过氧化值“第一滴定法”或者GB/T 5538的办法来进行测定，一般用国际通用单位mmol/kg来表示，测定结果填入预先制定的表格中(范本见表2)。

  10)常温保质期：因为试验条件与生产实践极为接近，以试验统计的未闻到哈味的存放天数作为常温保质期。

  0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液：吸取0.1mol/L的硫代硫酸钠10ml，注入100ml容量瓶中，加水稀释至刻度(用时新配)。

  先把18g动物油加热融化，然后加入18g植物油并混匀，即为36g混合油脂。用0.8kg玉米粉与0.4kg豆粕粉混合均匀，把48g复合预混料加入并混匀，然后把刚制备的36g混合油脂加入并混匀，即为试验基础饲料。将配置好的试验基础饲料按300g/份，一共称取4份备用。

  将饲料抗氧化剂样品1，样品2，样品3用分析天平各称取0.0900g，分别加入3份已称好的试验基础饲料中(即300g/吨饲料)，并混合均匀。另取一份未加任何饲料抗氧化剂的试验基础饲料作为空白对照。所有试验样品制作完毕，分别放置于500ml的烧杯中，并按饲料抗氧化剂的样品编号作对应编号。

  将恒温培养箱设置为100℃，并恒温，放入上述4个样品，关闭恒温箱箱门。待恒温箱再次恒温后，开始计时，当试验进行到第7小时时，观察发现空白对照开始有哈味了，其他都无哈味。然后每2小时观察一次，至只有一个样品无哈味时止，试验结束。此时，所有样品测定一次过氧化值。将所有的结果记录下来(见表1)。

  样品0中A＝5；B＝100；C＝30；D＝3.15；E＝3.15；对于空白样，第一次闻到哈味的时间减去间隔时间(100℃为2小时)才是样品最后一次未闻到哈味的时间；

  从试验结果(见表1)来看，样品3在100℃下保存了13小时，换算为常温保存期可达69天，其过氧化值也是最低的，所以效果最好。而样品1与样品2质量档次非常接近，样品1的过氧化值略低，效果稍好些，预测常温保质期比样品2多2天。

  0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液：吸取0.1mol/L的硫代硫酸钠10ml，注入100ml容量瓶中，加水稀释至刻度(用时新配)。

  先把18g动物油加热融化，然后加入18g植物油并混匀，即为36g混合油脂。用0.8kg玉米粉与0.4kg豆粕粉混合均匀，把48g复合预混料加入并混匀，然后把刚制备的36g混合油脂加入并混匀，即为试验基础饲料。将配置好的试验基础饲料按300g/份，一共称取4份备用。

  将饲料抗氧化剂样品1，样品2，样品3用分析天平各称取0.0900g，分别加入3份已称好的试验基础饲料中，并混合均匀。另取一份未加任何饲料抗氧化剂的试验基础饲料作为空白对照。所有试验样品制作完毕，分别放置于500ml的烧杯中，并按饲料抗氧化剂的样品编号作对应编号。

  将恒温培养箱设置为30℃，并恒温，放入上述4个样品，关闭恒温箱箱门。待恒温箱再次恒温后，开始计时，当试验进行到第28天，观察发现空白对照开始有哈味了，其他都无哈味。然后每10天观察一次，至最后一个样品无哈味时止，试验结束。在试验结束阶段，为了统计详细准确的保质期天数，能结合实际经验数据，并每天闻一次，做好记录。此时，所有样品测定一次过氧化值。将所有的结果记录下来(见表2)。

  因为试验条件与生产实践极为接近，以试验统计的未闻到哈味的存放天数作为常温保质期。将统计结果填入预先制定的表格(见表2)

  从试验结果(见表2)来看，样品3在30℃下保存了69天，时间最长，所以效果最好。而样品1与样品2质量档次非常接近，相差仅2天。

  因为本发明常温试验跟高温加速试验除了试验温度不同外，饲料抗氧化剂、基础饲料都一样，通过表1和表2对比能够准确的看出，高温试验预测得到常温下的保质期跟常温试验实际得到的保质期非常接近，由此也说明本发明高温加速氧化所预测的常温保质期是可信的，可完全用于指导企业实际生产。

  最后需要说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管申请人参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案做修改或者等同替换，而不脱离本技术方案的宗旨和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。